miR-181a调控PINK1/Parkin通路对骨质疏松大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响

摘要：

目的 探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病相关基因(Parkin)通路对骨质疏松(OP)大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响.方法 健康雌性SD大鼠20只,随机分为OP模型组(n=10)与对照组(n=10).OP模型组大鼠制备OP模型,提取OP大鼠破骨细胞,设置OP组(未转染)、si-miR-181a组(转染si-miR-181a载体质粒)、si-NC组(转染si-NC阴性对照质粒)、ad-miR-181a组(转染ad-miR-181a载体质粒)与ad-NC组(转染阴性ad-NC对照质粒),对照组大鼠破骨细胞正常培养,设为正常对照组.采用RT-PCR检测miR-181a的表达,MTT法及流式细胞术检测破骨细胞的存活及凋亡情况,透射电镜观察线粒体自噬情况,免疫荧光共定位检测线粒体中Parkin的表达情况,Western blotting检测PINK1/Parkin及自噬、凋亡相关蛋白的表达情况.敲低OP大鼠破骨细胞miR-181a后下调Parkin的表达,验证Parkin对miR-181a的逆转作用.双荧光素酶报告实验验证miR-181a与Parkin的靶向调控关系.结果 与正常对照组相比,OP组破骨细胞中miR-181a(1.59±0.15 vs.1.02±0.11)、Parkin+TOMM2+(2.02±0.20 vs.0.13±0.10)、Parkin(1.83±0.18 vs.1.13±0.10)、PINK1(1.93±0.19 vs.1.03±0.10)表达水平,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.89±0.18 vs.1.15±0.10)及细胞存活率(157.06％±12.32％vs.100.09％±0.05％)升高(P<0.05).与OP组相比,上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(222.96％±22.15％)升高,Parkin+TOMM2+蛋白表达水平(1.01±0.11)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.36±0.12)及细胞凋亡率(3.28％±0.35％)降低(P<0.05);下调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(106.96％±10.15％)降低,Parkin+TOMM2+蛋白表达水平(2.97±0.29)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(2.47±0.24)及细胞凋亡率(19.71％±1.83％)升高(P<0.05).双荧光素酶报告实验结果显示,Parkin为miR-181a的靶基因.下调Parkin的表达可逆转miR-181a低表达发挥的促进线粒体自噬及抑制细胞存活的作用(P<0.05).结论 上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达可靶向下调Parkin的表达抑制线粒体自噬激活,促进破骨细胞存活.

关键词：骨质疏松症、miR-181a、TEN诱导激酶1/帕金森相关基因、自噬、破骨细胞

所属期刊栏目：47

分类号：R58(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：浙江省医药卫生科技计划项目2021KY358

在线出版日期：2022-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：569-578