胎球蛋白A的纯化及其对3T3-L1脂肪细胞胰岛素通路的抑制作用

摘要：

目的 对胎球蛋白A(AHSG)蛋白进行纯化,并探讨其对脂肪细胞胰岛素通路的调节作用.方法 通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和Protamine亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白.培养3T3-L1前脂肪细胞并分化为成熟脂肪细胞,置于低糖DMEM培养基培养,然后加入终浓度为100μg/ml和600μg/ml的AHSG及终浓度为600μg/ml的人白蛋白(HAS)分别进行培养,最后用不同浓度(0、10、20nmol/L)的胰岛素刺激细胞.采用Western blotting检测AHSG和HSA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素下游分子IRS-1和Akt的磷酸化水平的影响.结果 从血浆中纯化的AHSG蛋白纯度达90%以上.纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对IRS-1蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml浓度下可以完全抑制IRS-1蛋白磷酸化;纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对Akt蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml的浓度下可以明显抑制Akt蛋白的磷酸化,而600μg/ml的HAS则不能抑制IRS-1和Akt蛋白的磷酸化.结论 从血清中纯化出的AHSG在生理浓度下可以抑制胰岛素对3T3-L1细胞中IRS-1和Akt蛋白的磷酸化作用,在脂肪细胞胰岛素通路中扮演着重要角色.

关键词：胎球蛋白A、胰岛素、受体、蛋白激酶类

所属期刊栏目：35

分类号：R34;Q786(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划项目2005AA218080

在线出版日期：2010-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：819-822