人线粒体核糖体蛋白S17 cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化

摘要：

目的克隆人MRPS17 cDNA,并在大肠杆菌中表达纯化.方法从人原代培养毛乳头细胞中分离总RNA,采用RTPCR及序列测定等方法获得人MRPS17 cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;C末端融合了6×His纯化标签的表达产物行Western印迹法分析并用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化;纯化蛋白行SDS-PAGE纯度分析.结果获得了人MRPS17 cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-MRPS17;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约13kD的目的蛋白;表达产物经Ni2+NTA离子交换树脂纯化,纯度＞90%.结论克隆得到了人MRPS17 cDNA,并在E.coli中成功表达和纯化了MRPS17蛋白,为后续研究奠定了基础.

关键词：核糖体蛋白质类、DNA、互补、基因表达

所属期刊栏目：31

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国科学院资助项目30300180;同济大学校科研和教改项目CSTC2004BB5043;中华医学会-欧来雅中国人健康皮肤研究项目2005020641;第三军医大学校科研和教改项目XG200314

在线出版日期：2006-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：42-44