丙型肝炎病毒NS5B基因的克隆及在大肠杆菌的分泌表达

摘要：

由于全长丙型肝炎病毒NS5B的疏水性,其表达和纯化非常困难.为了分泌表达NS5B, 作者对NS5B进行截短,缺失其疏水部分从而在大肠杆菌细胞中分泌表达HCV NS5B基因,并测定其活性.用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法,设计截去NS5B疏水部分, PCR引物以HCV全长质粒pBRTM/HCV-1为模板,克隆到pGEM-Teasy 载体中,双酶切后回收连接到pET-21b中表达.大肠杆菌培养上清过柱纯化,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,并用液闪近端分析(SPA)法分析NS5B RdRp活性.成功地构建了NS5B基因大肠杆菌表达载体,Western 免疫印迹显示NS5B蛋白在大肠杆菌细胞中表达.表达产物在大肠杆菌培养上清中存在,分子量68kD左右,而且[ 3H]总掺入率达6 900cpm.NS5B蛋白在大肠杆菌上清中表达成功,经过活性测定,所表达的NS5B具有活性功能.

关键词：肝炎病毒、丙型、基因、NS5B、大肠杆菌、基因表达

所属期刊栏目：27

分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：696-698