鱼类病毒性出血性败血症病毒核蛋白基因的原核表达

摘要：

通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定.结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221 bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1 mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48 ku.诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清分别用于SDS-PAGE电泳,结果表明目的蛋白主要以包涵体的形式存在.表达蛋白经过复性、纯化,得到了较高纯度的可溶性蛋白.经Western-blot检测表明,该表达产物能被羊抗VHSV阳性血清特异性识别.

关键词：病毒性出血性败血症病毒、核蛋白、基因克隆、原核表达、可溶性蛋白

所属期刊栏目：31

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：质检公益性行业科研专项项目201010020

在线出版日期：2012-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：376-380