拟南芥叶绿体血红素加氧酶AtHO1基因的克隆和多克隆抗血清制备

摘要：

为研究叶绿体血红素加氧酶HO1的生物学功能和分子作用机制,构建了拟南芥血红素加氧酶基因AtHO1的重组融合蛋白表达载体pET28a-At HO1,质粒转化到Escherichia coli BL21 (DE3)中诱导表达重组蛋白.经SDS-PAGE电泳检测,AtHO1的重组融合蛋白获得了高效表达,分子质量为28～36 ku,且为可溶蛋白.重组蛋白经NPNTA亲和层析法纯化后,得到纯度较高的蛋白.纯化产物免疫新西兰大耳兔获得了专一识别重组蛋白6×His-AtHO1的抗血清,进一步提取拟南芥和水稻叶片总蛋白,蛋白质印迹检测显示,在分子质量28～36 ku之间出现特异性条带,证明用重组蛋白6×His-AtHO1制备的多克隆抗血清可以与拟南芥和水稻HO1蛋白特异性结合,说明拟南芥HO1的抗血清能够用于水稻HO1的功能分析和应用研究.

关键词：拟南芥、水稻、叶绿体血红素加氧酶、原核表达、蛋白质印迹

所属期刊栏目：31

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目30971748

在线出版日期：2012-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：281-286