海洋细菌来源低温褐藻胶裂解酶的分泌表达和酶学性质研究

摘要：

为了筛选稳定性较好的低温褐藻胶裂解酶,本研究进行了海洋细菌分离鉴定、酶的编码基因克隆与分析、酶分泌表达与纯化、不同因素对酶活力和稳定性的影响以及酶解产物分析实验.结果显示,用以褐藻胶为唯一碳源的平板,筛选出一株能分泌低温褐藻胶裂解酶的海洋细菌SJ-H-12,基于16S rDNA序列构建进化树,该菌株鉴定为Yangia sp.SJ-H-12.进而克隆酶的编码基因Alyya,ALYYA属于PL5家族褐藻胶裂解酶.将基因在食品级宿主解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中进行分泌表达,重组ALYYA的活力达到34.2 U/mL,分子量约为39.0 kDa,具有较强的PolyM偏好性.ALYYA在25℃～35℃时表现出80％以上的活力,且在30℃时表现出最高活力;在pH为5.0～10.0的范围内稳定性较好,孵育后剩余超过60％的活力;0～2.0 mol/L的NaCl能明显激活ALYYA的活力.ALYYA降解褐藻胶的产物主要是二糖,另有少部分单糖和三糖,该酶是一种内切褐藻胶裂解酶.综上所述,本研究筛选到一株产低温褐藻胶裂解酶细菌,所产ALYYA是典型的低温褐藻胶裂解酶,具有优良的酶活力和稳定性.本研究为低温褐藻胶裂解酶的筛选和开发利用提供了参考数据.

关键词：褐藻胶裂解酶;分泌表达;编码基因;pH稳定性

所属期刊栏目：42

分类号：S917.1(水产基础科学)

资助基金：国家藻类产业技术体系CARS-50

在线出版日期：2021-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：117-124