基于lolB基因的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测病原霍乱弧菌方法的建立

摘要：

基于霍乱孤菌lolB基因保守序列设计1对特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测霍乱弧菌的方法.常规PCR检测仅霍乱弧菌扩增出大小为519bp的目的片段,其他3种病原弧菌均为阴性；SYBR Green Ⅰ实时定量PCR,在Tm为86.5～87℃,扩增产物的熔解曲线只出现1个单特异峰,无引物二聚体,表明该引物具有较好的特异性.SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增曲线反映了PCR的指数增长阶段和平台阶段；所制作的标准曲线在2.59×108～2.59×100拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.993,能对霍乱弧菌进行准确的定量分析.该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需4～5 h,较传统方法敏感、操作简单、耗时短,是霍乱弧菌引起的水产动物疾病的快速诊断及流行病调查的有效方法.

关键词：霍乱弧菌、lolB基因、SYBR Green Ⅰ、Real-time PCR

所属期刊栏目：33

分类号：O657.79(分析化学)

资助基金：江苏省水产三项工程项目PJ2010-58;连云港市科技攻关项目CG1134;江苏省自然科学基金项目BK2009163

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：104-110