ARHI基因对胃癌细胞株MKN28增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制研究
背景 ARHI已经被证实表达缺失与肿瘤的发生与进展相关.但是,目前尚不清楚ARHI基因对胃癌(gastric cancer,GC)是否具有增殖抑制作用,此次实验以GC细胞株MKN28为例,构建高表达pcDNA3.1-ARHI质粒,通过细胞转染技术转染MKN28细胞株,进一步研究ARHI因对GC细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.目的 以GC细胞MKN28为例,研究ARHI基因对GC细胞增殖、侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 构建pcDNA3.1-ARHI质粒,通过细胞转染技术转染MKN28细胞株,取处于对数期的空白对照组、阴性对照Mock组及脚高表达克隆株clone4细胞进行实验,以MTT比色法检测细胞增殖;细胞划痕检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测相关蛋白表达.结果 与正常MKN28细胞48 h增殖率1.257％±0.006％相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48h细胞增殖率分别为1.163％±0.003％(P＞0.05),0.826％±0.005％(P＜0.05);与正常MKN28细胞48 h迁移率(19.918％±0.233％)相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞迁移率分别为18.295％±0.534％(P＞0.05),4.299％±1.572％(P＜0.05);与正常MKN28细胞48 h侵袭率(234±3.61)相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞侵袭率分别为235±4.51(P＞0.05),93.3±2.08(P＜0.05);与正常MKN28细胞48 h总凋亡率(3.513％±0.015％)相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞总凋亡率分别为3.597％±0.25％(P＞0.05),14.133％±0.032％(P＜0.05);Western blot检测各组细胞内蛋白结果显示:与MKN28细胞相比,Mock组中ARHI蛋白为1.037±0.003(P＞0.05),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白为1.026±0.008(P＞0.05),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白为1.014±0.010(P＞0.05),蛋白激酶B(protein kinaseB,AKT)蛋白为1.001±0.005(P＞0.05),磷酸化AKT(p-AKT)蛋白为0.977±0.003(P＞0.05);高表达克隆株clone4中ARHI蛋白为2.088±0.007(P＜0.05),VEGF蛋白为0.456±0.004(P＜0.05),Bcl-2蛋白为0.468±0.005(P＜0.05),AKT蛋白为0.969±0.005(P＞0.05),p-AKT蛋白为0.502±0.001(P＜0.05).结论 ARHI基因过表达可抑制GC细胞MKN28的增殖,促进细胞凋亡,这可能与ARHI基因高表达后导致磷脂酰肌醇3-激酶/AKT通路中的VEGF、p-AKT蛋白表达降低有关.
ARHI基因、胃癌、增殖、凋亡
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辽宁省教育厅2019年科学研究经费项目;No.32027
2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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