miR-7靶向Sp3对急性胰腺炎腺泡细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
背景:重症急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一种发病急、进展快、死亡率高的严重疾病,其病因复杂,近年来研究发现,miRNA在AP的发生和发展中发挥重要作用,研究miRNA在AP中的机制对于AP的治疗、预防等有一定的帮助.而miR-7与胃癌、肺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种肿瘤的进展相关,但在AP中研究鲜有报道.目的:研究miR-7对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制,方法:用雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡A R42J构建AP模型,设置NC组、Cerulein组、miR-con组(转染miR-con)、miR-7组(转染miR-7 mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-7组(转染anti-miR-7)、Cerulein+anti-miR-con组(Cerulein处理后转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-7组(Cerulein处理后转染anti-miR-7)、Cerulein+pcDNA组(Cerulein处理后转染pcDNA)、Cerulein+pcDNA-特异性蛋白3(specificprotein 3,Sp3)组(Cerulein处理后转染pcDNA-Sp3)、Cerulein+anti-miR-7+si-con组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-con)、Cerulein+anti-miR-7+si-Sp3组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-Sp3),用脂质体法转染至AR42J细胞.ELISA法检测雨蛙素处理AR42J细胞的淀粉酶(Amylase,AMY)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的表达;qRT-PCR检测雨蛙素处理AR42J细胞中miR-7、Sp3 mRNA的表达水平;Western Blot检测Sp3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果:雨蛙素处理AR42J细胞后,AMY、TNF-α、IL-6的表达均呈现先升高后下降的趋势,且均在8h时达到最大,建模成功.相较于NC组,Cerulein组miR-7的表达水平显著升高;Sp3 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P＜0.01).相较于Cerulein+anti-miR-con组,Cerulein+anti-miR-7组miR-7的表达水平显著下降,细胞凋亡率显著降低(P＜0.01).相较于Cerulein+pcDNA组,Cerulein+pcDNA-Sp3组Sp3蛋白的表达水平显著升高,细胞凋亡率显著降低(P＜0.01).miR-7靶向负调控Sp3;抑制Sp3表达逆转了敲减miR-7对雨蛙素处理AR42J细胞的凋亡抑制作用.结论:敲减miR-7表达可以抑制AP腺泡细胞凋亡,其机制可能与靶向调控SP3有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.
miR-7、特异性蛋白3、急性胰腺炎、凋亡
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R735.2;R5;R681
2019-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
748-755
