异常凝血酶DCP基因克隆表达、纯化及单克隆抗体制备与鉴定

摘要：

目的:通过克隆、表达一种有前景的肝癌肿瘤标志物人去羟基凝血素(Des-γ-carboxy prothrombin,DCP),制备抗DCP单克隆抗体并初步鉴定其特性.方法:依据DCP基因序列,合成DCP全长基因,构建原核表达载体pColdⅡ-DCP,转化至Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以Ni2+亲和层析柱纯化带有His标签的DCP蛋白.纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备抗DCP单克隆抗体.以ELISA法检测抗体效价与亚型;Western blot和免疫组织化学染色鉴定抗体特异性.结果:成功表达并获得DCP蛋白,其相对分子量约为23000;获得l株稳定分泌抗人DCP单克隆抗体杂交瘤细胞株3B5; Western blot和免疫组织化学结果显示抗人DCP单克隆抗体能与DCP发生特异性结合,且ELISA检测抗体的效价为1∶2.43×105,其亚类为IgG2a.结论:成功制备了抗人DCP单克隆抗体,为进一步将该抗体应用于肝癌的早期诊断提供了重要工具.

关键词：异常凝血酶原、原核表达、杂交瘤技术、单克隆抗体、肝细胞肝癌、肿瘤标志物

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资助基金：南京市科技发展计划基金资助项目,No.201104029;江苏省医学重点人才基金资助项目.No.RC2011081;南京市医学科技发展基金资助项目,No.ZKX11176;Science and Technology Development Project of Nanjing,No.201104029;the Medical Key Talent Foundation of Jiangsu Province,No.RC2011081;the Medical Science and Technology Development Program of Nanjing,No.ZKX11176

在线出版日期：2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3932-3939