腺病毒携带IL-12治疗肝癌细胞株HepG2的体外实验

摘要：

目的:探讨腺病毒介导的白介素12(interleukin-12,IL-12)基因(AdvIL-12)转染能否在体外诱导出更强的抗(hepatocellular carcinoma,HCC)免疫效应.方法:在体外,用AdvIL-12转染HepG2作为实验组,以Adv-绿色荧光蛋自(green fluorescent protein,GFP)转染的HepG2和未转染的HepG2作为对照组进行培养.用划痕试验检测载有IL-12的腺病毒对HepG2细胞的迁移能力的影响；结晶紫法检测对HepG2的生长能力的抑制和杀伤作用；MTT检测对HepG2细胞增殖能力的抑制作用的影响；TUNEL法检测对HepG2细胞的凋亡效应的影响.结果:正常生长的HepG2单层贴壁生长,生长旺盛,镜下观察为梭形,胞浆均质透明,折光性好,胞间紧密连接,核质均匀,核仁清晰可见.实验组AdvIL-12作用24 h后HepG2细胞迁移距离明显受到抑制,且随浓度增大,HepG2细胞向划痕区移动的距离越来越小,细胞数量越少,划痕越宽.实验组AdvIL-12结晶紫染色深度随浓度梯度减少而逐渐加深.取10 μL AdvIL-12时对HepG2细胞杀伤效果最为明显.酶标仪检测AdvIL-12组、Adv-GFP组和HepG2空白对照组分别培养24、48、72 h后的4值(F1=95.7,F2=103.6,F3=165.8,P＜0.01)与对照组相比有统计学意义.光镜下可见凋亡细胞明显固缩,体积变小,胞质致密,核浓缩甚至消失,形成凋亡小体.实验组AdvIL-12组凋亡细胞数量明显多于对照组Adv-GFP组.结论:转染AdvIL-12的HepG2细胞能有效抑制HepG2细胞的生长,增殖和迁移能力,效果随浓度增大而增强,并能够促进HepG2细胞的凋亡效应,从而在体外达到明显的肿瘤抑制作用.

关键词：腺病毒、白介素-12、肝癌、Tunel

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资助基金：山东省2012科学技术发展计划基金资助项目,No.2012G0021845;山东省自然科学基金资助项目,No.2011ZRB01588;青岛市科技计划基础研究基金资助项目,No.11-2-4-2-28-jch;the Science and Technology Development Program of Shandong Province,No.2012G0021845;the Natural Science Foundation of Shandong Province,No.2011ZRB01588;the Science and Technology Foundation of Qingdao,No.11-2-4-2-28-jch

在线出版日期：2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3190-3197