小干扰RNA靶向抑制DcR3基因对肝癌细胞凋亡和迁移的影响

摘要：

目的:应用RNA干扰技术抑制人肝细胞癌细胞系HepG2细胞DcR3表达,并研究DcR3基因沉默后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响.方法:设计并合成特异性DcR3-siRNA 4条和阴性对照siRNA 1条,转染HepG2细胞,通过半定量反转录-PCR(RT-PCR)及免疫细胞化学方法检测其对DcR3表达的抑制作用并筛选出干扰效果最强的siRNA,应用流式细胞仪、DNAladder方法检测细胞的凋亡情况,应用划痕实验检测细胞体外迁移能力的变化.结果:各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3mRNA表达(P＜0.05),其中以DcR3-siRNA4的抑制作用最明显,抑制作用达62.9％；将DcR3-siRNA4转染HepG2细胞能明显抑制HepG2细胞DcR3蛋白的表达(P＜0.01).流式细胞仪检测结果显示,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的凋亡率(22.97％±2.10％)明显高于空白对照组(1.17％±0.32％)、脂质体转染组(1.44％±0.43％)和非特异性siRNA转染组(1.22％±0.40％)(均P＜0.001); DNA ladder实验发现特异性DcR3-siRNA转染组出现DNA ladder,而空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组均未出现DNA ladder.划痕实验结果显示,转染后24、48和72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组.结论:DcR3在肝癌细胞的凋亡及迁移中发挥重要作用,抑制DcR3的表达能诱导肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力.

关键词：DcR3、肝细胞癌、RNAi、凋亡、迁移

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资助基金：广西研究生教育创新计划基金资助项目,No.2007105981001M02;the Graduate Innovation Fund of Guangxi Zhuang Autonomous Region,No.2007105981001M02

在线出版日期：2013-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2772-2779