PLK1基因RNAi慢病毒载体的构建及对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响

摘要：

目的:研究慢病毒介导的PLK1(Polo-like kinase 1)基因RNAi对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响.方法:利用RT-PCR和Western blot检测不同食管鳞癌细胞中PLK1的表达.根据人PLK1mRNA序列设计干扰片段,Western blot检测干扰效率;利用划痕愈合实验及Transwell实验研究靶向PLK1的RNAi对食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的影响.将有效干扰序列构建至慢病毒干扰载体pGLV/H1/GFP+Puro中,测序鉴定.重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,制备的重组病毒感染食管鳞癌细胞,利用荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率;利用裸鼠肺转移模型实验研究慢病毒介导的PLK1基因RNAi对食管鳞癌细胞在体内侵袭转移能力的影响.结果:筛选出一种高表达PLK1的食管鳞癌细胞株TE-8用于实验研究;筛选出有效的干扰片段,并成功构建靶向干扰PL K1基因的慢病毒载体,制备重组病毒颗粒用于感染食管鳞癌细胞；靶向PLK1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移.结论:靶向干扰LK1基因的重组慢病毒能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移,PLK1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.

关键词：PLK1、侵袭、转移、慢病毒载体、RNAi、食管鳞癌

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资助基金：国家自然科学基金资助项目,Nos.30901779,81072608;山东省自然科学基金资助项目,No.ZR2010HM065;山东省高等学校科技计划基金资助项目,No.J10LC20;National Natural Science Foundation of China,Nos.30901779 and 81072608;the Natural Science Foundation of Shandong Province,No.ZR2010HM065;the Higher Educational Science and Technology Program of Shandong Province,China,No.J10LC20

在线出版日期：2013-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2128-2135