RKIP过表达对肝星状细胞在细胞外基质上黏附的抑制
目的:通过Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)过表达腺病毒感染肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC),模拟肝纤维化病理状态下细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分的改变,探讨RKIP对HSC黏附功能的影响.方法:实验共分两组,分别是RKIP过表达组(RKIP-AD)和阴性对照组(GFP-AD).首先确定细胞感染病毒的最适感染强度(multiplicity of infection,MOI)值,在倒置荧光显微镜下观察细胞状态,计数细胞荧光数,筛选出最适MOI值.Western blot方法确定病毒感染后验证外源RKIP在细胞内表达情况.已干预好的细胞稀释成1.0×105/mL的浓度种在盖玻片和已准备好的由matrigel、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白包被的24孔板中,37℃培养1h后,甲醛固定,结晶紫染色.200×纤维镜下观察并计数黏附的细胞数,资料数据以mean±SD表示,采用t检验进行统计分析.结果:人源HSC细胞株LX-2的腺病毒载体感染率可达到80％-90％,适宜的MOI值为5.RKIP过表达组较对照组蛋白表达增多(3.47±0.02 vs 1.74±0.13,P＜0.05).与GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的过表达抑制细胞在matrigel上的黏附(80±14 vs 152±42,P＜0.05).与GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的过表达抑制细胞在Ⅰ型胶原上的黏附(70±13 vs 138±36,P＜0.05).与GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的过表达抑制细胞在纤维连接蛋白上的黏附(133±27 vs 276±106,P＜0.05).结论:体外过表达RKIP可以抑制HSC在胶原基质上的黏附.
肝纤维化、肝星状细胞、Ra激酶抑制蛋白、细胞外基质、黏附
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国家自然科学基金资助项目.Nos.81200311,81170411 河北省自然科学基金资助项目,No.C2010000530
2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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