慢病毒介导的重组人α1-抗胰蛋白酶在小鼠体内的表达

摘要：

目的:构建重组人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)因子的慢病毒表达载体,并通过体外细胞水平和小鼠体内分析其表达情况.方法:通过RT-PCR的方法扩增出hAAT基因的编码序列,并构建重组慢病毒质粒；经体外包装后,感染鼠成纤维细胞及注射小鼠.荧光显微镜下观察GFP的表达情况,同时对收获的细胞及感染小鼠的肝脏或血浆进行Western blot、ELISA检测.结果:获得重组hAAT因子的慢病毒表达质粒pLVX-ser;包装后得到8×106 TU/mL滴度的慢病毒颗粒.通过荧光显微镜下观察,显示重组hAAT因子在成纤维细胞中正常表达；对小鼠尾静脉注射病毒之后,进行hAAT因子检测,Western blot结果说明hAAT因子在小鼠体内成功表达；通过ELISA检测发现hAAT在小鼠体内的表达平均达190 μg/L左右,而且在慢病毒的介导下hAAT在小鼠中的表达可持续3 mo以上.结论:重组慢病毒载体可高效、持续表达hAAT因子,为通过基因工程生产重组hAAT因子以及为α1-AT缺乏症的基因治疗奠定基础.

关键词：α1-抗胰蛋白酶、α1-AT缺乏症、慢病毒

所属期刊栏目：20

分类号：R318.14(医用一般科学)

在线出版日期：2012-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1720-1725