慢病毒介导HBV X基因稳定表达HepG2细胞系的建立

摘要：

目的:构建乙型肝炎病毒X基因(HBV X)重组慢病毒表达载体,建立稳定表达HBV X蛋白(HBx)的HepG2细胞系.方法:应用PCR法从质粒pIERES2-EGFP-HBV中扩增X基因片段,克隆至慢病毒载体pZac2.1,应用PCR、酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,RT-PCR、免疫组织化学、Western blot鉴定HBx的表达.结果:酶切鉴定和基因序列测定证实长度为489 bp的HBx基因成功克隆至慢病毒表达载体pZac2.1-HBx;重组慢病毒经包装、纯化后获得滴度为1×108 TU/mL,通过感染HepG2细胞株和嘌呤霉素筛选,8-10 d形成生长形态良好的单克隆细胞株HepG2-HBx; RT-PCR鉴定显示细胞株HepG2-HBx在3d,14d,30 d和2 mo后均可见稳定表达的HBx mRNA;利用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法鉴定,细胞株HepG2-HBx可稳定表达HBx蛋白.结论:成功构建了HBV X重组慢病毒载体,获得稳定表达HBx的HepG2细胞系,为进一步研究HBx的生物学功能及致病机制提供细胞模型.

关键词：乙型肝炎病毒、X基因、HepG2、慢病毒、稳定细胞株

所属期刊栏目：20

分类号：R512.62(传染病)

资助基金：广东省科技计划2010B060900092

在线出版日期：2012-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：638-643