表达大鼠IL-2、B7-1基因CBRH7919细胞的建立

摘要：

目的:研究携带大鼠IL-2、B7-1目的基因的CBRH7919细胞(即CBRH7919/IL-2/B7-1)体外表达目的基因的能力,方法:RT-PCR扩增Wistar大鼠IL-2、B7-1目的基因,分别克隆至重组逆转录病毒载体pBaBe-puro及pMSCV-neo,构建逆转录病毒载体pBaBe-puro-IL-2及pMSCV-neo-B7-1,重组质粒转染病毒包装细胞293FT(胚胎肾细胞),产生病毒后感染CBRH-7919,用抗生素puro/G418筛选出细胞抗性克隆,并用RT-QPCR、Western blot及ELISA实验证实抗性细胞在转录水平和蛋白水平IL-2、B7-1的表达情况.结果:用RT-PCR方法成功扩增了Wistar大鼠IL-2及B7-1目的基因,经测序结果证实成功构建了pBaBe-puro-IL-2及pMSCV-neo-B7-1重组质粒.利用该重组质粒成功构建了CB RH7919/I L-2/B7-1细胞系,实时荧光定量PCR检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞中IL-2和B7-1基因的平均表达量分别是CBRH-7919-pmscv-neo的4.153倍和17.040倍；West blot检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞B7-1表达是无基因修饰CBRH7919的3倍；ELISA法检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞IL-2表达量是无基因修饰CBRH7919的190余倍.结论:成功建立了稳定高效表达大鼠IL-2、B7-1的CB RH7919/IL-2/B7-1细胞系,为下一步开展研究肝癌免疫基因治疗奠定了基础.

关键词：白介素2、B7-1、CBRH7919、原发性肝癌

所属期刊栏目：19

分类号：R4(临床医学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2660-2663