miRNA干扰质粒的构建及其对肝癌HepG2细胞IGF-Ⅱ表达的抑制作用

摘要：

目的:研究miRNA干扰质粒对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝细胞癌表达的抑制作用,探讨IGF-Ⅱ在肝细胞癌治疗中的价值.方法:以人IGF-Ⅱ基因序列设计并合成4条miRNA,将miRNAA插入质粒构建pcDNA<'TA>6.2-GW/EmGFP miR 1-4干扰载体;筛选、转染HepG2细胞,以荧光定量PCR分析靶向肝癌IGF-Ⅱ基因表达的干扰效果;以XELISA法比较转染前后IGF-Ⅱ蛋白表达水平.结果:测序证实,成功构建了真核IGF-Ⅱ干扰质粒MR-IGF-Ⅱ-1-4,将干扰质粒转染至HepG2细胞,镜下显示转染效率50%;经荧光定量PCR扩增,沉默IGF-Ⅱ基因表达效率MR.IGF-Ⅱ-1为33%、MR-IGF-Ⅱ.2为43%、MR-IGF-Ⅱ-3为0%、MR-IGF-Ⅱ-4为3%.将其中MR-IGF-Ⅱ-2转染:EHepG2细胞,在转录和蛋白水平上对IGF-Ⅱ具有较高干扰效率,分别达43.0%和43.5%.结论:成功构建了人miRNA干扰质粒,他能有效抑制HepG2胞IGF-Ⅱ的表达.

关键词：肝细胞癌、胰岛素样生长因子Ⅱ、微小RNA、质粒构建、基因沉默

所属期刊栏目：19

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：江苏省自然科学基金;南通大学自然科学研究项目

在线出版日期：2011-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1015-1021