隐源性肝炎相关新基因CHBP2的原核表达及蛋白纯化

摘要：

目的:构建隐源性肝炎相关新基因CHBP2原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并纯化CHBP2融合蛋白.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的Huh7细胞mRNA为模板,扩增获得CHBP2基因片段,连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,转化大肠杆菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得CHBP2融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实蛋白表达的特异性.超声破碎表达细菌,SDS-PAGE分析.利用镍离子亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.结果:成功构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,并将CHBP2融合蛋白成功表达,通过Western blot免疫印迹,证实了蛋白表达的特异性.SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达,并对蛋白成功进行了纯化和复性,获得了表达蛋白的纯品.结论:成功表达、纯化CHBP2蛋白,为研究CHBP2蛋白的生物学功能打下了基础.

关键词：隐源性肝炎、CHBP2、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：15

分类号：R5(内科学)

在线出版日期：2007-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2394-2398