人自身抗原CYP2D6 285 bp基因片段克隆、真核表达及免疫性鉴定

摘要：

目的:真核表达人自身抗原细胞色素P4502D6(CYP2D6)显性表位285 bp基因片段,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,为自身免疫性肝炎抗体的检测提供特异性抗原.方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备,PCR扩增鉴定.表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,利用GST亲和层析法进行纯化.然后对其产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质印迹法(WB)及蛋白质质谱学(MALDI-TOF)检测.结果:PCR产物约290 bp,与预期285 bp接近.pEGH-CYP2D6重组阳性克隆PCR鉴定与预期大小接近,SDS-PAGE和WB结果显示,融合蛋白Mr37 000,具有天然人自身抗原CYP2D6的免疫原性.质谱蛋白肽指纹数据通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对,与CYP2D6蛋白同源性最高.结论:成功克隆表达人自身抗原CYP2D6的显性表位,为建立新的自身免疫性肝炎抗体检测方法奠定了基础.

关键词：自身抗原、融合基因、细胞色素P4502D6、显性表位

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分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30471617;国家高技术研究发展计划863计划2002AARZ2011

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1357-1361