高灵敏化学发光法体外HBV转录与复制水平的检测体系

摘要：

目的:建立一套稳定的化学发光法体外HBV转录与复制水平检测体系.方法:将人肝癌细胞株HepG2和可产生复制型HBV颗粒的HepG2.2.15细胞培养3 d,收集细胞均分为两份,分别抽提细胞总RNA和HBV复制中间体DNA.以地高辛标记的HBV重组质粒pHBV4.1作为探针,分别进行Northern及Southern吸印杂交,以化学发光法检测杂交结果.将pHBV4.1以对数级差稀释后分别点样于尼龙膜用作内标,同时进行杂交及检测.结果:HepG2.2.15细胞提取物中检测出较强的HBV转录产物:3.5kb,2.4/2.1kb HBV mRNA的信号,及较强的HBV复制产物:HBV复制中间体DNA的信号.HepG2细胞提取物检测结果均为阴性.内标检测信号强度随点样浓度逐渐递减而减弱,检测的灵敏度可达到1 pg,接近同位素法检测的敏感度.整个实验重复3次以上结果均相似.结论:成功建立了一套稳定的高灵敏化学发光法体外转录与复制水平检测体系.

关键词：乙型肝炎病毒、转录、复制、化学发光法、检测

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分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划30325036;四川省应用基础研究计划04JY029-002-7

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1346-1351