甘草甜素下调基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因的表达

摘要：

目的:了解甘草甜素对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子活性的调节作用,探讨甘草甜素的抗纤维化机制.方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子,命名为TIMP-1P,以T-A克隆法,将TIMP-1P基因片段连入载体pGEM-Teasy.将获得的质粒pGEMTeasy-TIMP-1p,与报告质粒pCAT3-basic分别用NheI和XhoI双酶切后构建TIMP-1启动子报告基因表达载体pCAT3-TIMP-1P,以重组表达质粒pCAT3-TIMP-1P瞬时转染HepG2细胞,4 h后以0.1 mmol甘草甜素刺激,48 h后收获细胞.同时以转染pCAT3-basic的HepG2细胞为阴性对照,每组设复孔对照,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测标本在415 nm波长的吸光度值,其数值反映细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达水平.结果:构建的报告基因表达载体.pCAT3-TIMP-1P经过序列分析和酶切鉴定正确.瞬时转染HepG2细胞后,pCAT3-basic的吸光度值为0.004±0.002,pCAT3-TIMP-1P为2.329±0.685,经方差分析两者差异有统计学意义(F=26.075,P＜0.05),pCAT3-TIMP-1在HepG2细胞中能够启动CAT的表达.转染HepG2细胞的pCAT3-TIMP-1p经0.1 mmo1甘草甜素刺激后,其吸光度值为0.268±0.009,同期未经甘草甜素刺激的pCAT3-TIMP-1P吸光度值为0.490±0.153,方差分析两者差异有统计学意义(F=35.775,P＜0.05).结论:甘草甜素可下调TIMP-1启动子的转录活性,抑制TIMP-1的基因表达.

关键词：甘草甜素、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1、抗纤维化

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分类号：R5(内科学)

资助基金：中国科学院资助项目C03011402;C30070689;军队科技攻关项目98D063;军队科研项目98H038;军队科技攻关项目01Q138;军队科技攻关项目01MB135

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2183-2187