基因表达谱芯片筛选NS5ATP3转染细胞差异表达基因

摘要：

目的:应用基因芯片技术,检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活基因NS5ATP3的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明NS5ATP3蛋白可能的分子生物学功能.方法:设计并合成NS5ATP3基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS5ATP3蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的NS5ATP3编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP3.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误.提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有6个基因表达水平显著上调,18个基因表达水平显著下调.结论:应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS5ATP3转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS5ATP3蛋白可能的生物学功能提供依据.

机标关键词：差异表达基因、表达谱芯片、筛选、转染细胞、nonstructural protein、hepatitis C virus、基因表达谱、肝母细胞瘤细胞、芯片技术、基因表达水平、真核表达载体、生物学功能、限制性内切酶分析、基因片段、非结构蛋白、编码基因、分子生物学技术、应用、逆转录、聚合酶链反应

所属期刊栏目：12

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金C03011402,C30070689;军队科技攻关项目98D063;军队杰出人才基金98H038;军队科技攻关青年基金01Q138;军队科技攻关项目01MB135

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：306-310