应用抑制性消减杂交技术筛选TAHCCP2的反式调节基因

摘要：

目的:筛选与克隆TAHCCP2的反式激活基因,了解其可能存在的调节功能线索.方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioinformatics)技术筛选并克隆TAHCCP2反式激活的新型靶基因.以TAHCCP2表达质粒pcDNA3.1(-)-TAHCCP2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取muRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建人TAHCCP2反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到70个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200-1000 bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得15种编码基因.结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了TAHCCP2可能存在的调控机制的线索,尚需进一步的实验证明.

机标关键词：应用、抑制性消减杂交技术、筛选、反式激活、调节基因、生物信息学分析、消减文库、细胞裂解液、阳性克隆、激活基因、插入片段、蛋白编码基因、转染、扩增、聚合酶链反应、同源性分析、载体、线索、细胞凋亡、物质代谢

所属期刊栏目：12

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金C03011402,C30070689,C39970674,C39900130;军队科技攻关项目98D063;军队杰出人才基金98H038;军队科技攻关青年基金01Q138;军队科技攻关项目01MB135

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：302-305