甘薯曲叶病毒PCR-层析试纸条快速检测方法的建立

摘要：

为了能够快速且同时大批量检测甘薯样本是否感染甘薯曲叶病毒(SPLCV),本研究建立了SPLCV cp基因的PCR-层析试纸条快速检测方法.首先,本研究构建SPLCV cp基因的重组质粒作为阳性对照,并对标记的特异性引物的扩增条件进行优化.结果显示,退火温度为57℃时,特异性扩增效果最佳;特异性检测结果表明,该引物对与甘薯无症状1号病毒(SPSMV-1)、甘薯杆状DNA病毒B(SPBV-B)、甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)和甘薯潜隐病毒(SPLV)均无交叉反应,表明该引物对具有较高的特异性.其次,本研究构建了 PCR-层析试纸条快速检测系统,当抗体包被磁粒时,20 μg地高辛单克隆抗体为0.1 mg羧基磁粒的最佳抗体标记量.特异性扩增产物在新构建的层析系统中3 min左右进行可视化检测;灵敏度检测结果表明,该层析系统的最低检测限为0.000 1 ng·μL-1基因组DNA,灵敏度是普通凝胶检测的10倍,说明该系统灵敏度较高.综上,本研究建立的PCR-层析试纸条检测系统具有可视性、灵敏度高、简便快速的特点,且可以同时对大批量的样本进行SPLCV检验,满足了脱毒薯苗上市前检测量大的需求.

关键词：甘薯、甘薯曲叶病毒、PCR-层析试纸条、灵敏性

所属期刊栏目：37

分类号：S432.41;Q7;S858.28

资助基金：河南省科技惠民专项项目182207310015

在线出版日期：2023-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：955-961