匍匐型地被菊再生及遗传转化体系的建立

摘要：

为构建有效的地被菊再生和遗传转化体系,本研究以匍匐型地被菊雨花落英叶片为外植体,研究不同苗龄和激素配比对叶盘再生的影响;通过农杆菌介导法将外源基因导入野生型植株中,研究预培养、延迟培养、抗生素浓度等遗传转化条件对转化效率的影响.结果 表明,雨花落英叶盘转基因最适再生条件为,以苗龄为30 d的组培苗幼嫩叶片为外植体,设置再生培养基配方为MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.8 mg·L-1,此时再生率高达91.11％,平均芽数为5.90;最优遗传转化组合为预培养2d,侵染5min,共培养2d,延迟培养5d,之后进行选择培养.羧苄青霉素在延迟培养阶段最适抑菌浓度为400mg·L-1;潮霉素叶盘筛选的最适选择压为8～10 mg·L-1,生根筛选最适浓度为11 mg·L-1;培养后期加入6-KT可以有效提高抗性芽的再生率;调节6-BA浓度为1.0mg·L-1,蔗糖浓度为40 g·L-1,可以将得到的玻璃化苗转化为正常苗.分子鉴定结果表明,15株抗性苗中有10株阳性苗,阳性苗概率为67％;与野生型植株相比,9个株系的CmERF 12基因均受到了明显的抑制表达.本研究建立了地被菊雨花落英再生和遗传转化体系,为进一步进行基因功能研究和遗传改良奠定了一定的理论基础.

关键词：匍匐型地被菊、高效再生、遗传转化体系、玻璃化

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资助基金：国家自然科学基金项目31471901、31672182;江苏省自然科学基金项目BK20161449;中央高校基本科研业务费专项资金项目KYTZ201602

在线出版日期：2019-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1686-1697