HSP60对天祝白牦牛原代培养的支持细胞增殖的影响

摘要：

HSP60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用.支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响.为研究HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦牛原代支持细胞,通过差速贴壁法和Tris-HCL低渗缓冲液进行纯化处理,运用免疫荧光染色和Feulgen染色鉴定细胞,经流式细胞仪检测得到96.2％高纯度支持细胞.构建HSP60过表达载体pIRES2-EGFP-HSP60,合成靶向siRNA沉默HSP60,瞬时转染支持细胞后,经qPCR检测发现过表达组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均上调,沉默组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均下调.MTS试验检测细胞的增殖情况,过表达HSP60组中的支持细胞增殖效率各时间点均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组中支持细胞的增值率各时间点均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著.qPCR检测细胞增殖标志基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA),结果表明,过表达HSP60组的cyclin D1基因在48 h时的表达显著高于空白对照组和空质粒组,PCNA基因的表达在24、48、72 h时均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组cyclin D1基因和PCNA基因的表达在24、48、72 h时均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著.综上,HSP60在白牦牛睾丸支持细胞增殖调控中的作用是正向调控.本试验结果为进一步研究HSP60对白牦牛睾丸发育和精子发生的影响奠定了理论基础.

关键词：HSP60、天祝白牦牛、支持细胞、细胞增殖

所属期刊栏目：31

分类号：S82;R73

资助基金：“十二五”农村领域国家科技计划项目2013AA02505-3

在线出版日期：2017-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1486-1493