喹乙醇单克隆抗体的研制及其ELISA方法的建立

摘要：

喹乙醇属喹噁啉类药物,因其抗菌、可提高蛋白同化作用而常被用作促生长剂,但研究发现,喹乙醇过量使用会蓄积毒性,可致畸致突变,因此为了加强喹乙醇的质量安全监控,需开展其快速检技术研究.本试验中喹乙醇丰抗原(OLA-HS)采用琥珀酸酐法进行合成,质谱法鉴定;喹乙醇人工抗原(OLA-HS-BSA;OLA-HS-OVA)采用活化酯法制备,SDS-PAGE电泳和紫外扫描进行结果鉴定.BALB/C鼠免疫后取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经筛选、克隆最终得到1株能稳定分泌抗喹乙醇单抗的杂交瘤细胞株2B3.经鉴定,2B3的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链为k链;制备腹水后测定其间接ELISA效价达1×10-6以上;制备的单克隆抗体特异性高,与喹乙醇结构类似物均无交叉反应.用此单抗建立的ELISA方法表明,检测灵敏度IC20值为5.36ng·mL-1;检测饲料中喹乙醇的平均添加回收率为70.7％～134.6％,准确性较好.喹乙醇单克隆抗体的研制和间接竞争ELISA分析方法的建立为下一步饲料中喹乙醇ELISA试剂盒的开发奠定了基础.

关键词：喹乙醇、单克隆抗体、竞争ELISA、饲料

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资助基金：教育部博士点基金20123326120001,浙江省教育厅项目Y201222925,浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室开放课题2011E1002,浙江工商大学研究生科研创新基金1110XJ1513137

在线出版日期：2015-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1081-1087