Achaetomium sp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析

摘要：

甘露聚糖酶作为最主要的半纤维素酶类现已被广泛地应用在饲料、造纸、洗涤剂、食品及石油开采等领域.本研究从高温真菌Achaetomium sp.Xz8菌株中利用兼并引物和Thermal asymmetricinterlaced PCR (Tail-PCR)的方法克隆获得一个新的糖苷水解酶5家族的甘露聚糖酶基因(man5 Xz8).基因全长1 239bp,序列分析发现其编码412个氨基酸和1个终止密码子,预测的信号肽序列为N端的20个氨基酸.将成熟蛋白序列克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9中,利用甲醇诱导重组酵母菌表达目的蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白分子量约55.0 kDa.对其酶学性质进行测定,Man5Xz8的最适pH值为5.0,在pH值9.0可以保持40％以上的酶活性,在pH值5.0 ～9.0具有良好的pH稳定性.最适作用温度为50℃,并对SDS具有较高的耐受性.以角豆胶为底物,Man5Xz8的比活、Km及Vmax值分别为101.6 U·mg-1、4.4 mg·mL-1、128.2 μmol· min-1·mg-1.因此,Man5Xz8为后期研究甘露聚糖酶的工业应用和酸碱催化机制提供了良好的材料.

关键词：Achaetomium sp.Xz8、甘露聚糖酶、克隆、毕赤酵母、酶学性质

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资助基金：国家“863”项目2012AA022208

在线出版日期：2015-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：87-94