RG108对猪胎儿成纤维细胞甲基化水平及克隆胚胎发育的影响

摘要：

本研究使用RG108处理猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF),研究其对细胞甲基化水平和核移植效率的影响.使用0.05、0.5、5和50 μmol·L-1 RG108分别处理细胞24、48和72 h后,用高效液相色谱和亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)法分析细胞整体甲基化水平和印迹基因H19和IGF2R的DMR区甲基化率,并检测RG108处理对细胞生长、凋亡、染色体变化及随后的核移植效率的影响.整体甲基化水平结果通过两因素方差分析,发现RG108处理浓度与处理时间无交互作用,处理浓度间细胞甲基化水平差异不显著,但处理时间却能显著的影响甲基化水平,且50 μmol·L-1RG108处理细胞72 h后整体甲基化水平显著低于对照组.BSP分析结果表明,5和50 μmol·L-1处理PFF 72 h后H19的DMR区域甲基化率显著降低.RG108对细胞生长有一定的抑制作用,且0.5、5和50μmol· L-1组经处理72 h后凋亡比例显著提高,但对细胞的染色体数目没有显著影响.PFF经5和50μmol·L-1RG108处理72 h后能显著提高卵裂率和囊胚细胞数,且5μmol·L-1组囊胚率也显著提高.结果表明,RG108降低细胞整体甲基化水平呈时间依赖性,且同时降低H19的DMR区域甲基化率.PFF经5μmol·L-1浓度处理72 h组能显著提高核移植胚胎效率.

关键词：克隆猪、RG108、甲基化、细胞凋亡、核移植、亚硫酸氢盐测序

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资助基金：国家转基因生物新品种培育重大专项2009ZX08006-014B,2008ZX08006-005

在线出版日期：2014-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：14-21