抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定

摘要：

为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB（DE3）,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB（DE3）中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB（DE3）中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。

关键词：Ω序列、四价抗体、原核表达

所属期刊栏目：26

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划课题2006AA102449

在线出版日期：2012-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：118-122,175