植酸酶根特异表达载体的构建及大豆转化

摘要：

应用PCR方法分别从胡萝卜基因组中扩增出96bp的外展蛋白信号肽编码序列片段,从拟南芥基因组中扩增出1454bp的pyk10启动子片段,用RT-PCR方法从无花果曲霉（Aspergillus ficuum3.4322）中扩增出phyA基因,长1347bp。然后,分别克隆到pMD18-T载体。应用已设计的限制酶切位点,通过5个中间载体将3段DNA片段连接构成2.9kb的表达单元Ppyk10-S-phJA（KSA）,将KSA片段插入初始载体pC-GENERAL,构建成植酸酶根特异表达载体pPC-KSA。利用农杆菌介导法将无花果曲霉植酸酶基因phyA转入到栽培大豆品种吉林35中,在大豆转基因植株中正确表达,产生有活性的植酸酶,且能分泌到根外。T3代植株根系分泌植酸酶活性比未转化植株提高了2～4倍。

关键词：外展蛋白信号肽、pyk10启动子、phyA基因、大豆、转基因、植酸酶、根特异表达

所属期刊栏目：25

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技部转基因生物新品种培育重大科技专项2009ZX08004-004B 2009ZX08004-001B;河北省自然科学基金C2009000868

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：892-897