靶向PGRMC1基因sh RNA真核表达载体的构建和鉴定
目的 构建并鉴定靶向PGRMC1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体.方法 根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经MspI和smoi双酶切线性化的质粒载体中.为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染方法将构建好的3个重组载体导入人卵巢癌细胞株SKOV3中,采用免疫组化法和RT-PCR法检测SKOV3细胞系转染前、后PGRMC1基因表达.结果 经限制性酶MsqI酶切位点的酶和Smo I双重消化,PGRMC1成功建立到pcDNA3.1(-)的真核表达载体中.通过RT-PCR和Western印迹分析证实重组质粒已经成功传递到SKOV3细胞系.结论 靶向PGRMC1基因shRNA真核表达载体的构建成功,为进一步研究PGRMC1基因在SKOV3细胞中的作用奠定了实验基础.
PGRMC1、短发夹RNA、SKOV3细胞、载体构建
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R329.2(人体形态学)
2020-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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