女贞RAPD-PCR实验条件的优化

摘要：

采用单因素梯度试验对影响女贞(Ligustrum lucidum Ait.)RAPD扩增的若干重要影响因素(包括MgCl2、dNTPs、随机引物、TaqDNA聚合酶浓度、模板DNA用量,以及退火温度与循环次数等)进行了优化.优化后的女贞RAPD-PCR反应体系为:每25μL体积中含10×反应buffer 2.5 μL,2.5 mmol·L-1 MgCl2 3.0μL,0.2 mmol·L-1 dNTPs 0.5μL,2.0 UTaq酶0.4 μL,0.4μmol·L-1引物1.0 μL,DNA模板60 ng.PCR扩增程序:在94℃条件下预变性4 min,然后依次在94℃条件下变性30 s,38 ℃条件下退火45 s,72 ℃条件下延伸2 min;进行40个循环,最后在72 ℃条件下延伸10 min,并于16℃条件下保存.以该优化的RAPD反应体系对木犀科女贞属植物不同居群间的女贞种质材料的扩增,均能获得丰富而清晰的条带,且重现性好.

关键词：女贞、RAPD、影响因子、体系优化

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分类号：S571.1

资助基金：国家自然科学基金资助项目39860048;海南省教育厅基金资助项目Hjkj2012-51

在线出版日期：2015-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：374-380