猪伪狂犬病毒野毒株 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 诊断试剂盒的研制

摘要：

根据GenBank中猪伪狂犬病毒（PRV ）gE基因序列设计特异性的引物，PCR扩增获得PRV gE基因片段，构建重组质粒pMD18 T gE ，作为阳性标准品。对SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR反应条件进行优化，建立猪PRV SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR诊断方法，研制诊断试剂盒。扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰，无引物二聚体，对猪圆环病毒（PC V 2）、猪细小病毒（PPV ）、PRV （gE基因缺失株）、猪源 E ．coli、猪瘟病毒（CSFV ）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV ）均无阳性信号扩增，且重复性好，灵敏度可达2．3×101拷贝/μL。结果表明，研制的PRV野毒株SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒特异、灵敏、快速、重复性好，适于伪狂犬病毒临床样品的检测。

关键词：猪伪狂犬病毒、野毒株、gE基因、荧光定量PCR、诊断试剂盒

分类号：S854.4+3(动物医学（兽医学）)

资助基金：贵州省科技厅农业攻关项目[2010]3085；贵州省畜禽健康养殖技术创新能力建设项目[2010]4004

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：128-131,144