PEDVN蛋白单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立

摘要：

[目的]制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体,并建立检测PEDV的间接免疫荧光试验方法.[方法]以重组表达的PEDV N蛋白为免疫原,免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,分离高抗体效价小鼠的脾细胞,与SP2/0细胞融合.筛选分泌抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.在已经感染PEDV的Vero细胞中,以抗PEDV N蛋白的单克隆抗体为一抗,FITC?羊抗鼠IgG为二抗,建立PEDV的间接免疫荧光检测方法.[结果]制备的杂交瘤细胞株可以稳定分泌抗PEDV N蛋白抗体,细胞上清液的ELISA抗体效价在1:3200以上,而诱导的小鼠腹水抗体效价在1:1000000以上.将单克隆抗体应用在间接免疫荧光试验时,最适条件为?20℃80％(φ)丙酮溶液中固定30 min;一抗用PBS缓冲液按体积比1:1000稀释,4℃ 条件下过夜孵育;二抗用PBS缓冲液按体积比1:100稀释,37℃ 条件下孵育1 h.以建立的间接免疫荧光试验方法检测细胞中的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PPRV)、猪肠道 α 冠状病毒(PEAV)、猪轮状病毒(PoRV)和PEDV,只有PEDV显示阳性,其他病毒均为阴性.[结论]制备了抗PEDV N蛋白单克隆抗体,以该抗体为一抗建立检测PEDV的间接免疫荧光试验方法具有良好的特异性,为PEDV的实验室检测及PEDV在培养细胞中的定位和动态分布提供了有效的手段.

关键词：猪流行性腹泻病毒、N蛋白、单克隆抗体、间接免疫荧光试验

所属期刊栏目：41

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省产学研重点项目 2014B090901046

在线出版日期：2020-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：27-35