水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析

摘要：

采用双水相分配法和离心法对水稻叶片的细胞质膜进行了纯化.选用聚合物Dextran T 500/ PEG 3350质量分数分别为6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％的双水相体系,对3次分配后的细胞质膜纯化效果进行了研究,并进行了细胞质膜标志酶H+ -ATPase的活性测定、柠檬酸铅-醋酸铀双染色及电镜检测.结果表明:聚合物质量分数为6.3％的双水相体系可以获得高纯度的质膜微囊,且随分配次数的增加,可以有效减少其他内膜的污染,其质膜标志酶VO3-4 -ATPase的相对活性高达93.5％.粗质膜经过3次两相分配后的蛋白质产率为2.73％.非离子型去垢剂Brij 58对质膜H+-ATPase的活性变化影响结果表明,纯化的质膜微囊封闭性较好,主要为正向型质膜微囊.质膜蛋白质经增溶缓冲液溶解及1-D SDS-PAGE的结果表明,纯化后的质膜有效减少了特定蛋白质条带的丰度,使蛋白质条带的分布更为均匀.双向电泳结果表明,纯化后的质膜双向电脉图谱具有低背景、高分辨率和重复性的优点,为进一步的水稻质膜蛋白质组研究提供了可靠的试验材料.

关键词：水稻、质膜、双水相分配法、双向电泳

所属期刊栏目：33

分类号：S435.111.41(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金30971887,30600399;广东省自然科学基金10151064201000008,07006683

在线出版日期：2012-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：11-17