可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建

摘要：

滑膜间质干细胞（SMSCs）与其他来源的间质干细胞相比，具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力。但由于SMSCs固有地表达I型胶原，这将会大大损害再生软骨的整体质量。为解决此问题，文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA，并将其构建到腺病毒载体上。接着通过PacI酶切反应，使重组腺病毒载体线性化并通过脂质体转染293细胞进行病毒包装。收集的病毒初液进行滴度测定后，再次通过293细胞进行病毒扩增，经过纯化后，最终获得高滴度重组腺病毒。将重组腺病毒分别感染成纤维细胞和成骨细胞，通过荧光显微镜观察，检测转染效率，利用实时定量PCR实验验证siRNA的干扰效果。实验结果表明，包装后的重组腺病毒具有高的转染效率，能成功编译siRNA，并具有抑制I型胶原表达的能力。

关键词：滑膜间质干细胞、腺病毒、siRNA、I型胶原、载体、转染

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目51303058；华南理工大学中央高校基本科研业务费专项资金资助项目2011ZM0010；广东省自然科学基金资助项目S2011040000208；教育部留学回国人员科研启动基金

在线出版日期：2014-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：95-100