豆豉纤溶酶的定向进化

摘要：

为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率( kcat)是野生型的2.57倍.

关键词：枯草芽孢杆菌、豆豉纤溶酶、易错PCR、定向进化、筛选

所属期刊栏目：38

分类号：Q319(遗传与变异)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30970044

在线出版日期：2010-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：138-141,146