Reteplase基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达

摘要：

进行了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中实现了胞外表达.以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上并进行了序列测定.测序结果表明:克隆到的基因序列长1.1 kb,与已发表的Reteplase基因同源性达99.91%,其编码的氨基酸顺序一致.文中还构建了甲醇毕赤酵母分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用Pac Ⅰ单酶切将pMETαA-r-PA线性化后,采用电转化的方法将其导入甲醇毕赤酵母PMAD16中,PCR和表型鉴定表明,筛选到Reteplase基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上的阳性克隆.经摇瓶初步培养及以甲醇为唯一碳源诱导表达,胞外Reteplase表达水平最高达27.93 mol/(s·L).

关键词：组织型纤溶酶原激活剂、甲醇毕赤酵母、Reteplase(r-PA)、表达

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：黑龙江省自然科学基金D0352

在线出版日期：2007-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：25-29,50