MDM2的异常表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移以及对CD4+T和CD8+T细胞免疫浸润的影响

摘要：

目的 探讨鼠双微体同源基因2(murine double minute 2,MDM2)在胃癌中的表达,以及MDM2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移以及CD4+T和CD8+T细胞免疫浸润的影响.方法 从基因表达综合(Gene Expression Om-nibus,GEO)数据库中提取胃癌芯片数据集GSE62254,统计分析MDM2在胃癌中的表达情况.通过基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析MDM2表达对胃癌患者预后的影响.基于单样本基因集富集分析(single-sample gene-set enrichment analysis,ssGSEA)探讨GSE62254中23种免疫细胞的浸润情况.免疫组织化学法检测临床样本组织中MDM2和CD4+T和CD8+T细胞的表达.细胞实验,分为sh组(shRNA-MDM2下调MDM2表达)和sh-NC组(shRNA-MDM2-NC无下调MDM2表达的作用),si组(siRNA-MDM2降低MDM2表达)和 si-NC 组(siRNA-MDM2-NC 无降低 MDM2 表达的作用),pc 组(pcDNA 3.1-MDM2 过表达 MDM2)和 pc-NC 组(pcDNA3.1-MDM2-NC 无过表达 MDM2 的作用),mimic 组(MDM2 mimic 上调 MDM2 表达)和 mimic-NC 组(MDM2-NC无上调MDM2表达的作用).动物实验,分为si组(下调MDM2表达)、si-NC组(无下调MDM2表达),mimic组(升高MDM2表达)、mimic-NC组(无升高MDM2表达),每组各5只小鼠.5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-de-oxyuridine,EdU)以及Transwell小室检测各组细胞的增殖、迁移与侵袭性能.动物实验检测各组细胞的体内生长与转移能力;Western blot检测细胞和小鼠瘤体组织中MDM2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达;同时细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测小鼠脾组织单细胞悬液中CD8+T细胞的体外杀伤肿瘤细胞的能力.结果 与癌旁正常组织相比,MDM2在胃癌组织的表达明显升高(P＜0.05);与MDM2高表达患者相比,MDM2低表达患者的总生存期生存曲线明显升高(P＜0.05);与MDM2高表达组相比,MDM2低表达组中CD4+T、CD8+T细胞的浸润明显升高(P＜0.05);临床样本的免疫组织化学和相关性分析结果显示,MDM2的表达与CD4+T、CD8+T细胞的浸润水平呈负相关关系.细胞实验结果显示,与si-NC组相比,si组PAMC-82细胞中EDU阳性细胞比例、细胞侵袭和迁移数量以及细胞中MDM2、PCNA以及Vimentin的表达明显下降,E-cadherin的表达明显升高(P均＜0.05);与mimic-NC组相比,mimic组PAMC-82细胞中EDU阳性细胞比例、细胞侵袭和迁移数量以及细胞中MDM2、PCNA以及Vimentin的表达明显升高,E-cadherin表达明显下降(P均＜0.05).动物实验结果显示,与si-NC组相比,si组小鼠瘤体组织的质量、病灶转移比例、瘤体组织中MDM2、PCNA和Vimentin的表达明显下降,瘤体组织中E-cadherin表达、CD4+T免疫组织化学评分、CD8+T免疫组织化学评分明显升高(P均＜0.05);与mimic-NC组相比,mimic组小鼠瘤体组织的质量、病灶转移比例、瘤体组织中MDM2、PCNA和Vi-mentin 的表达明显升高,瘤体组织中E-cadherin表达、CD4+T免疫组织化学评分、CD8+T免疫组织化学评分明显下降(P均＜0.05).小鼠脾组织中CD8+T细胞对各组PAMC-82细胞的体外杀伤实验结果显示,si组细胞的存活率明显下降(P＜0.05);与mimic-NC组相比,mimic组细胞的存活率明显升高(P＜0.05);酶联免疫吸附试验(enzyme-linked im-munosorbent assay,ELISA)结果显示,与si-NC组相比,si组细胞上清液中γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的含量明显升高(P均＜0.05),与mimic-NC组细胞相比,mimic组细胞中IFN-γ及TNF-α的含量明显下降(P均＜0.05).结论 在胃癌中,MDM2的表达升高,高表达的MDM2能明显促进细胞的增殖、迁移和侵袭,增强肿瘤细胞抵抗CD4+T、CD8+T细胞的杀伤能力,促进胃癌进展.

关键词：鼠双微体同源基因2、胃癌、增殖、侵袭、迁移、免疫细胞浸润

所属期刊栏目：38

分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：四川省卫生健康委员会科研课题19PJ027

在线出版日期：2024-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：543-552