慢性HBV感染中MagT1调节活化T细胞功能的分子机制研究

摘要：

目的 研究慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染中MagT1调节活化T细胞功能的分子机制.方法 ①筛选HBV-DNA持续阳性超过6个月,检测值大于1.0×105 IU/ml,且排除其它病毒感染、肝炎、肝硬化的慢性HBV感染患者5例,同时随机选取正常人5例.②采集患者外周血,分离单个核细胞,用γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)、白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、CD3抗体、白细胞介素1α(interleukin 1 alpha,IL-1α)活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标志物CD25,比较HBV感染组与正常组T细胞的活化能力.③构建包装镁离子转运蛋白1(magnesium transporter 1,MagT1)过表达和MagT1-shRNA慢病毒,分别感染两组T细胞,以流式细胞仪法检测各组T细胞周期的变化,western blot法检测MagT1蛋白及通道蛋白磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated-PI3K,p-PI3K)、雷帕霉素(mammalian target of rapamycin,mTOR)、磷酸化雷帕霉素(phosphorylated-mTOR,p-mTOR)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-Akt,p-Akt)的水平.结果 流式细胞仪检测表明T细胞活化后,正常组、HBV感染组T细胞活化后CD25+T细胞阳性率分别由(15.4±1.37)％、(6.56±1.66)％上升为(66.62±1.52)％、(30.63±1.83)％.同时流式细胞仪检测表明HBV感染组对照与正常组对照相比,T细胞阻滞于G0/G1期(P＜0.01),而上调MagT1可以修复HBV感染患者阻滞的T细胞周期,从而恢复T细胞的增殖能力.Western blot表明慢性HBV感染组对照MagT1低于正常组对照(P＜0.01),PI3K、mTOR和Akt表达差异两组无统计学意义(P＞0.05),但p-PI3K、p-Akt和p-mTOR水平显著下降(P均＜0.05).上调MagT1后,正常组、HBV感染组PI3K、mTOR和Akt表达没有明显变化(P＞0.05),但p-PI3K、p-Akt和p-mTOR水平显著升高,且正常组高于HBV感染组(P＜0.05).下调MagT1后,正常组、HBV感染组PI3K、mTOR和Akt表达没有明显变化(P＞0.05),但p-PI3K、p-Akt和p-mTOR水平显著下降,且HBV感染组低于正常组(P＜0.05).结论 HBV感染组较正常组在T细胞活化后MagT1蛋白表达降低,T细胞的增殖能力和活化程度减弱,主要阻滞于G0/G1期.其机制与PI3K、mTOR和Akt磷酸化水平降低,使mTOR信号通路受到抑制有关.过表达MagT1表达可以升高PI3K、mTOR和Akt磷酸化水平,重新激活mTOR信号通路,提高T细胞增殖能力和活化程度,从而逆转T细胞功能耗竭.

关键词：乙型肝炎病毒、镁离子转运蛋白1、T细胞耗竭、mTOR信号通路

所属期刊栏目：33

分类号：R512.6+2(传染病)

资助基金：湖北省卫生健康委员会面上项目WJ2019M263

在线出版日期：2019-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：238-242