复制型HBV-Tg小鼠原代肝细胞的培养

摘要：

目的 建立复制型HBV-Tg原代肝细胞体外培养方法,观察HBV-Tg小鼠原代肝细胞的氧化应激敏感性.方法 改良的两步灌注法分离、纯化、培养HBV-Tg小鼠原代肝细胞,24孔板培养7天,每天换液,收集上清,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙氨酸转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转移酶(aspartate transaminase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和病毒学指标HBsAg、HBV-DNA的水平;分离HBV-Tg小鼠与野生型Balb/c鼠肝细胞,培养24h后加不同浓度酒精,于16h后检测两种小鼠原代肝细胞培养上清的AST水平.结果 HBV-Tg小鼠原代肝细胞从铺板第3天开始,LDH、ALT、AST水平达到平衡,膜稳定性恢复正常;在第3～5天ALB水平稳定于较高水平;HBV复制及表达指标(HBsAg、HBV-DNA)在铺板后1～5天能保持较高水平;酒精对原代肝细胞的氧化应激损伤,浓度<2%时,野生型Balb/c鼠肝细胞损伤程度明显低于HBV-Tg小鼠,浓度≥2%时,两种鼠肝细胞的损伤程度相当.结论 复制型HBV-Tg小鼠原代肝细胞培养可以在体外稳定维持肝细胞活性与功能,表达高水平的HBV-DNA和HBsAg,为体外研究乙型肝炎病毒发病机制提供新的模型.

关键词：乙型肝炎病毒、活性氧簇、酒精、细胞模型、原代肝细胞

所属期刊栏目：25

分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：国家科技重大专项2008ZX10002-011

在线出版日期：2011-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：97-100