体外培养获得稳定高效胚胎干细胞滋养层的实验研究

摘要：

目的 筛选并优化获得稳定的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)滋养层细胞的来源及其体外培养的最佳条件,为胚胎干细胞体外存活提供必要条件. 方法 分别取人工流产胎儿皮肤组织、昆明小鼠孕12.5、14.5、18.5d胚胎和新生鼠(P0)组织,分离培养原代胚胎成纤维细胞(embryonic fibroblasts, EFs) 并传代制成滋养层.采用活细胞拒染法和免疫细胞化学染色等技术,观察并比较两种来源以及不同时相来源制备的滋养层细胞的功能状态差异. 结果 细胞活性状态:①人胚来源第1～5代成纤维细胞活性均好;但1～2代时杂细胞较多,此后可见深染色细胞逐渐增多.②E12.5d、E14.5d鼠胚来源的各代细胞均较同代E18.5d和P0来源的活性细胞数目高(P＜0.05).以E14.5d第3～6代细胞最易培养存活.P0来源第6代与E14.5d来源同代细胞相比,深染变形细胞增多达30%.细胞分泌功能:①人胚来源第3～5代细胞I型胶原蛋白免疫阳性细胞数目少且染色较淡.②鼠胚来源的以E12.5d、E14.5d、E18.5d的第3～6代细胞免疫阳性细胞数目最多,且染色深; P0来源第6代细胞免疫阳性细胞染色深浅不一. 结论 采用人胚胎来源的成纤维细胞的活性尚可,但分泌功能稳定性欠佳.鼠胚E12.5～18.5d来源的第3～6代成纤维细胞,具有细胞活性强、分泌功能旺盛的特点,是作为胚胎干细胞赖以存活滋养层的最佳选择.

关键词：胚胎成纤维细胞、胚胎干细胞、滋养层

所属期刊栏目：24

分类号：R321-33(人体形态学)

资助基金：广西科学研究与技术开发基金项目0592007-1G

在线出版日期：2011-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：439-442