水通道蛋白4基因对肿瘤坏死因子-α诱导的关节软骨细胞损伤的影响

摘要：

目的 探讨水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)基因对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α诱导的兔关节软骨细胞损伤的影响.方法 小干扰水通道蛋白4(small interference-aquaporin4,si-AQP4)组由属于小干扰RNAs(small inter-ference RNAs,siRNAs)的si-AQP4靶向抑制AQP4,对照组由小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)经LipofectamineTM 2000转染至分离培养的兔膝关节软骨细胞,采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染后的2组细胞中AQP4的蛋白表达水平.后续研究分为对照组、TNF-α组、AQP4-siRNA组,采用噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumro-mide,MTT)]法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率;western blot法检测与增殖相关的增殖细胞核抗原(prolifera-ting cell nuclear antigen,PCNA)、p21基因,与凋亡相关的survivin基因、Bax基因,与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)相关的MMP-3、MMP-13、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1),与核因子活化B细胞κ轻链增强子(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)信号通路相关的NF-κB p65和KB抑制蛋白激酶α(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha,IKKα)的蛋白表达水平.结果 转染AQP4-siRNA的兔关节软骨细胞AQP4表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).TNF-α组细胞活力及PCNA、Survivin和TIMP-1的蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率及p21、Bax、MMP-3、MMP-13、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).AQP4-siRNA组细胞活力及PCNA、Survivin和TIMP-1的蛋白表达水平均高于TNF-α组,细胞凋亡率及p21、Bax、MMP-3、MMP-13、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达水平均低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AQP4基因表达可通过抑制NF-κB信号促进兔骨软骨细胞活力、抑制凋亡、抑制MMPs表达,从而对TNF-α诱导的细胞损伤起保护作用.

关键词：关节软骨细胞、AQP4基因、TNF-α诱导、凋亡、MMPs

所属期刊栏目：39

分类号：R681.3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：海南省自然科学基金项目814379

在线出版日期：2018-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：448-453