Hsa-miR-212-5p调控黑色素瘤细胞WM35和A375增殖侵袭的作用机制研究

摘要：

目的 明确hsa-miR-212-5p抑制色素瘤细胞WM35和A375增殖和侵袭的作用及其机制.方法 收集5对临床黑色素瘤及其癌旁组织,Real time-PCR检测hsa-miR-212-5p及KLF4基因mRNA相对含量,Western blotting检测KLF4蛋白表达;生物信息学预测hsa-miR-212-5p与KLF4基因3′UTR区结合位点并通过荧光素酶报告基因实验进行验证;转染hsa-miR-212-5p mimics,inhibitor或者阴性对照(negative control,NC)到WM35和A375细胞,Real time-PCR和Western blotting检测转染后48 h各组细胞hsa-miR-212-5p含量和KLF4蛋白表达;MTT法检测转染后72 h各组细胞增殖活性;Transwell检测转染后48 h各组细胞侵袭能力.结果 临床组织检测数据表明,与癌旁组织相比较,肿瘤组织中KLF4蛋白表达明显升高,hsa-miR-212-5p含量则明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).与报告基因表达载体单独转染组比较,hsa-miR-212-5p mimics,inhibitor与野生型荧光素酶报告基因共转染组可以明显抑制或增强胞内荧光素酶活性,差异有统计学意义(P<0.05);hsa-miR-212-5p mim-ics和hsa-miR-212-5p inhibitor转染对突变型荧光素酶报告基因载体荧光素酶活性无明显影响,差异有统计学意义(P>0.05).WM35和A375细胞转染后48 h,与细胞对照组比较,hsa-miR-212-5p mimics转染组细胞内hsa-miR-212-5p含量明显增强(P<0.05),hsa-miR-212-5p inhibitor转染组细胞内hsa-miR-212-5p含量明显减弱(P<0.01),NC转染组与细胞对照组比较,hsa-miR-212-5p含量差异无统计学意义(P>0.05);KLF4蛋白表达在各组细胞中具有与hsa-miR-212-5p含量变化相反的趋势.染后24～72 h,与细胞对照组比较,hsa-miR-212-5p mimics或inhibitor转染组细胞增殖活性明显降低或者增强(P<0.05),阴性转染组在所有检测时间点的细胞增殖活性与细胞对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).hsa-miR-212-5p mimics或inhib-itor转染能够明显抑制或者进一步促进WM35和A375侵袭能力.结论 黑色素瘤细胞增殖和侵袭的增加与Hsa-miR-212-5p含量降低有关;上调hsa-miR-212-5p表达,可以通过抑制KLF4蛋白的表达进而达到抑制WM35和A375细胞增殖和侵袭的目的.

关键词：黑色素瘤、KLF4、hsa-miR-212-5p、增殖、侵袭

所属期刊栏目：39

分类号：R532.1(寄生虫病)

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：224-230