报告基因系统HSV1-sr39tk/FIAU监测治疗基因表达的体外研究

摘要：

构建HSV1-sr39tk为报告基因,以VEGF165为治疗基因的重组腺病毒载体Ad5-sr39tk-IRES-VEGF165(Ad5-SIV),将其以不同感染复数(MOI=0、10、25、50、75、100)感染大鼠骨髓间充质干细胞,用免疫激光共聚焦技术检测HSV1-sr39tk与VEGF165的表达.用酶联免疫吸附试验(ELISA)监测感染病毒后细胞培养上清中VEGF165蛋白分泌量;细胞摄取131I-FIAU实验监测HSV1-sr39tk报告基因的表达情况,以腺病毒包装增强型绿色荧光蛋白(Ad5-EGFP)为对照.结果显示:免疫共聚焦显微镜可观察到HSV1-sr39tk蛋白与VEGF165蛋白在细胞内成功表达;VEGF165蛋白分泌情况与MOI间呈线性正相关(P<0.05);感染Ad5-SIV后细胞对131I-FIAU摄取率增高与MOI间呈线性正相关(P<0.05).不同时间摄取实验结果显示:30-150 min间细胞摄取率迅速增高,之后增高减慢,进入平台期.MOI相关摄取结果与MOI相关ELLISA结果具有较好相关性(P<0.05).Ad5-SIV经感染后可在大鼠骨髓间充质细胞中成功表达,并且治疗基因VEGF与报告基因HSV1-sr39tk的表达呈正相关,说明可通过报告基因HSV1-sr39tk监测治疗基因VEGF165的表达,为动物水平报告基因显像提供理论支持.

关键词：血管内皮生长因子、骨髓间充质细胞、报告基因、基因治疗、突变型Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺激酶

所属期刊栏目：33

分类号：R817.4(放射医学)

资助基金：国家自然科学基金30571816,30772208,30830041

在线出版日期：2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：592-597