三苯基甲烷类染料氧化酶基因(tpmD)在大肠杆菌中的无诱导表达

摘要：

为了解决嗜水气单胞菌DN322对鱼类的潜在致病性问题,有必要克隆表达该菌的三苯基甲烷染料脱色酶基因tpmD.通过PCR方法获得该基因,并与脱色希瓦氏菌S12的NAD(P)H脱氢酶基因启动子和用于荧光标记的编码CCPGCC的碱基序列融合,将有启动子和无启动子的融合基因片段分别连接到质粒pMD18-T中,转化大肠杆菌E.coli DH5α和E.coli BL21.结果发现,有启动子的融合基因能被E.coil在不加诱导物IPTG的条件下高效正确表达,脱色酶活性甚至超过基因供体菌DN322.将上述两株大肠杆菌工程菌株在自然水体中进行孔雀石绿污染小试处理,60d内在每个350mL反应体系中累积共投加大于10000mg的孔雀石绿,脱色率一直保持在92%以上;细菌数量最后增加了5～10倍.研究结果证明,基因工程菌在不加营养物的条件下也有很强的脱色活性和长期的存活能力;在tpmD基因3'端加入的用于螯合双砷荧光染料的18bp编码氨基酸碱基序列不影响此基因的表达和酶的脱色活性,这将赋予此工程菌可示踪性.

关键词：嗜水气单胞菌脱色酶基因(tpmD)、三苯基甲烷染料、希瓦氏菌启动子、无诱导表达

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分类号：X171(环境生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA062322;国家自然科学基金30800031;广东省科技计划项目2007A020903001;广东省科技攻关项目2007A020300007;广东省科学院人才基金200601;野外科学实验站基金sytz200710

在线出版日期：2009-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：527-535