重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性

摘要：

将携带重组瑞替普酶(reteplase, rt-PA)的质粒成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)后，诱导表达获得包涵体，考察了诱导剂浓度、培养温度和培养时间等条件对目标蛋白表达量的影响。在此基础上，对高效表达的 rt-PA 包涵体体外复性过程进行了详细研究。首先利用单因素实验考察了复性液pH、GSH浓度、GSH/GSSG比例、蛋白浓度等各种复性条件对复性效果的影响；并结合正交实验设计，进一步研究了高蛋白浓度下复性后 rt-PA 酶活变化情况。以0.2 mmol·L?1 IPTG诱导，在33℃下培养6 h，每升发酵液约可获得1.7 g粗制包涵体。适宜的复性条件为蛋白浓度50μg·ml?1，pH 10.0，GSH浓度1 mmol·L?1，GSH/GSSG比例8，复性收率为87.2%。影响高蛋白浓度下rt-PA复性的关键因素为复性液初始pH及GSH浓度，在800μg·ml?1蛋白浓度下复性后rt-PA比活可达7.54×104 IU·mg?1，荧光光谱分析结果表明复性后rt-PA恢复了其天然态结构。

关键词：生物分离、蛋白质复性、二硫键、正交实验设计、瑞替普酶

分类号：TQ028.8(一般性问题)

资助基金：国家自然科学基金项目21036005。

在线出版日期：2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：230-237